Kreatif Education - Disini penulis akan berbagi pengetahuan tentang bagaimana cara Uji HA dan HI. Sebelum kita masuk kedalam materi Uji Ha dan Hi, teman teman harus mengetahui Pengertian HA , HI. Apa manfaat uji HA dan HI.
Hemaglutination (HA) serta Hemaglutination Inhibition (HI) Test
1. Mengetahui ada tidaknya perkembangan virus ND dengan menggunakan uji HA serta HI cepat.
2. Mengetahui ada tidaknya perkembangan virus ND dengan menggunakan uji HA serta HI lambat.
3. Mengidentifikasi virus yang menghalangi aglutinasi dengan uji HI cepat.
4. Mengukur titer antibodi pada virus ND dengan uji HI lambat.
5. Uji hemaglutinasi dengan pelat mikro untuk ketahui titer enceran virus yang paling kecil yang masih tetap dapat mengaglutinasi eritrosit ayam serta kendala aglutinasi dengan pelat mikro bermanfaat untuk ketahui titer pengenceran paling kecil antibodi pada serum ayam yang masih tetap dapat menghalangi aglutinasi virus spesifik.
Pemeriksaan Mikrobiologi Uji HA
UJI HEMAGLUTINASI (HA)
Hemaglutinasi yang dikarenakan oleh antibodi pada antigen pada permukaan sel darah merah. Umpamanya untuk memastikan kelompok darah bisa dikerjakan reaksi hemaglutinasi. Sebagian virus spesifik memiliki kekuatan untuk berikatan dengan permukaan sel darah merah dari spesies berlainan hingga berlangsung aglutinasi.
Hemaglutinasi di mana sel darah merah cuma berperan jadi pembawa antigen, sel darah merah spesifik bisa dilapiskan dengan antigen sesudah permukaannya dirubah sifatnya dengan asam tannin atau kromium klorida. Sesudah antigen melekat pada permukaan sel darah merah, antigen ini bisa ditetapkan dengan serum yang sesuai sama. Keuntungan reaksi ini yaitu mempermudah lihat hasil reaksi karna dikerjakan dengan partikel-partikel yang besar. Reaksi ini dimaksud juga passive heamagglutination.
Baca Juga : REAKSI-REAKSI UJI KARBOHIDRAT
Uji HA mempunyai tujuan untuk :
Membedakan subtipe HA
Mengukur nilai HA sediaan virus Influenza
Pengukuran titer HA dikerjakan ketika :
kultur virus (sebagian titer virus yang berhasil dikultur)
ambil stock virus
sebelumnya lakukan uji HI
pemilihan kandungan 4 HAU untuk standarisasi antigen uji HI
uji HA1
Langkah Kerja Uji Hemaglutinasi (HA)
Alat serta Bahan :
Microplate dengan basic berupa V (untuk ayam/kalkun) atau U (untuk manusia gol O/marmut)
Micropipet
PBS (Phosphat Buffer Saline)
Antigen (virus utuh H1N1 inactivated)
Sel darah merah ayam segar
Langkah Kerja
Siapkan microplate dengan basic berupa V
Masukan 50 µl PBS kedalam sumur A2 – A12 serta B2 – B12 (duplo)
Masukan 100 µl antigen kedalam sumur A1 serta B1
Masukan 100 µl kontrol sel darah merah (SDM)
Serial twofold dilution, masukan antigen lewat cara pengenceran bertahap
ambillah 50 µl antigen dari sumur A1, masukan ke sumur A2 (up and down ±5 kali untuk mengaduk), ambillah 50 µl kombinasi barusan dari sumur A2 lantas masukan ke sumur A3, kerjakan lewat cara yang sama teruskan hingga A11, buang sisa 50 µl dari sumur A12
kerjakan juga untuk duplo pada baris B2 – B12
duplo HA
Masukan semasing 50 µl sel darah merah ayam pada semuanya well dari mulai sumur A12 serta B12 hingga sumur A1 serta B1
Campur dengan baik dengan manual (ketuk-ketuk dengan perlahan-lahan pinggir microplate pada tiap-tiap sisinya)
Inkubasi pada suhu ruangan (22-25oC) ± 15 menit check pada well apakah SDM telah mengendap.
Tulis hasil
Hasil uji HA
ha 2
Untuk lebih terang bisa diliat pada contoh gambar berikut ini :
BACA JUGA : Cara Membuat Preparat basah dan Preparat Kering, Paling Lengkap dan Prakrtis
uji HA
Berlangsung endapan hemaglutinasi
(-)
Berlangsung hemaglutinasi
(+)
kontrol
PEMBAHASAN
Pada praktikum ini juga akan dikerjakan pengukuran titer HA sediaan virus H1N1 yang juga akan dipakai untuk standarisasi uji Kendala aglutinasi (HI). Didapat hasil kalau titer antigen 16 HAU yang berarti pada pengenceran 1/16 HA Unit antigen masih tetap berikatan pada sel darah merah serta mengakibatkan hemaglutinasi.
Antigen standard untuk uji HI pada praktikum ini yaitu 8 HA unit/50 µl. Kalkulasi pengenceran antigen dengan membagi 8 (berdasar pada volume reaksi 50 µl) karna kita menginginkan juga akan peroleh 8 unit HA/50 µl. 16 HA belum juga menjangkau standarisasi 8 HAU jadi diperlukan pengenceran lewat cara membahkan 50 µl Antigen dengan 100 µl PBS dengan perbandingan 1 : 2.
Titer HA yaitu pengenceran teratas yang masih tetap bisa mengaglutinasi eritrosit. HA prima diikuti dengan susunan sel darah merah dengan rata pada basic sumuran microplate serta penjernihan dari cairan dibagian atas tanpa ada terjadinya pengendapan. Sedang hasil negative memberikan sel darah merah berupa titik di dalam sumuran.
Sebagian virus dapat mengaglutinasikan sel darah merah. Kekuatan ini jadi contoh dari kesibukan biologik serta kesibukan ini bisa dihambat oleh antibodi spesifik. Bagian partikel virus yang khusus bisa berhubungan dengan reseptor mukoprotein pada sel darah merah serta permukaan sel beda. Hubungan dari bagian reseptor serta virion buat aglutinasi sel darah merah jadi terlihat. Enzim virus neuraminidase memecah ikatan pada virus serta sel, serta melepas keduanya kedalam larutan.
KESIMPULAN
Menambahkan antigen pada sel darah merah bisa menimulkan reaksi aglutinasi di mana antigen juga akan melekat pada permukaan sel darah merah. Pada praktikum ini juga akan dikerjakan pengukuran titer HA sediaan virus H1N1 yang juga akan dipakai untuk standarisasi uji Kendala aglutinasi (HI).
Inilah sekilas pengetahuan saya tentang Uji HA dan HI semoga bermanfaat.